کلونینگ و بیان ژن drRRA باکتری داینوکوکوس رادیودورانس در اشریشیا کلی سویه Origami

سابقه و هدف: داینوکوکوس رادیودورانس یکی از باکتری‌های مقاوم به پرتو است و می‌تواند در محیط‌های رادیو اکتیو که سایر موجودات قادر به رشد در آن نیستند، به حیات خود ادامه دهد. مطالعات نشان می‌دهد که چندین پروتئین آنتی اکسیدان و ترمیم کننده DNA در مقاومت بخشی آن نسبت به پرتو نقش دارند. پروتئین DrRRA یکی از پروتئین‌های تنظیمی مهم داینوکوکوس رادیودورانس در مقاومت بخشی به پرتو است. هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان ژن drRRA در اشریشیا کلی بوده است. مواد و روش‌ها: ژن drRRA داینوکوکوس رادیودورانس بصورت سنتتیک در وکتور pGEM-B1 ساخته شد و به دنبال آن در وکتور بیانی pET21a ساب کلون شد. برای تایید ساب کلونینگ، هضم آنزیمی و توالی‌یابی انجام شد. برای تایید بیان ژن drRRA در اشریشیا کلی سویه Origami، ژل الکتروفورز پلی اکریل آمید و وسترن بلاتینگ انجام شد. یافته‌ها: پلاسمید pET21a حاوی ژن drRRA به همراه برچسب هیستیدینی در قسمت C-ترمینال بطور موفقیت آمیز ساخته شد. همچنین، پروتئین نوترکیب DrRRA بصورت داخل سلولی در اشریشیا کلی ترانسفورم شده تولید شد. نتیجه‌گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که ساب کلونینگ و بیان ژن drRRA در میزبان اشریشیا کلی امکان‌پذیر می‌باشد، همچنین، میزان بیان پروتئین هدف مناسب بوده و می‌توان مقاومت بخشی پروتئین DrRRA را به پرتو در سیستم‌های پروکاریوتی و یوکاریوتی نیز بررسی کرد.